治疗性蛋白质是一类独特的大分子药物，其结构比小分子药物复杂得多
在制造和储存的不同阶段，蛋白质可能会受到化学或酶促产生的初级结构修饰，即翻译后修饰(PTMs)，从而导致治疗蛋白的产品质量属性(pqa)的整体异质性。影响药物疗效和安全性的一系列修饰被归类为关键产品属性(cpq)，必须在各种质量控制(QC)过程中进行监控。
多属性法(MAM)是利用液相色谱(LC)和高分辨率精确质谱(HRAM)同时监测多个pqa的一种新兴应用。MAM的一个主要优点是它可以在氨基酸残留水平上检测PTMs，这是使用紫外线或荧光检测的传统基于谱的方法无法实现的。基于LC-HRAM-MS的MAM工作流程包括将治疗蛋白初始酶切成不同长度的肽，然后使用由水和乙腈组成的流动相(甲酸(FA)或三氟乙酸(TFA)作为改性剂进行梯度分离，然后对洗脱的肽进行HRAM-MS分析，以确定确定PTMs的序列覆盖范围。
作为生物制药行业QC的分析方法，MAM必须具有鲁棒性，并根据严格的法规要求进行验证。用于流动相的溶剂和试剂必须具有高纯度，并且不含可能引起干扰的污染物。在最近发表的一项由30多个领先的生物制药和LC-MS仪器供应商实验室参与的MAM联盟实验室间研究中，“色谱伪像”和“污染”被认为是峰检测结果异常的两个主要原因。图1显示了使用两种不同牌子的LC-MS级乙腈制备的流动相进行两次对照(空白)运行的例子。如图所示，品牌X LC-MS等级具有升高的背景，可能会损害灵敏度。此外，使用X牌乙腈作为流动相产生的重复峰模式可能严重干扰肽峰检测。这些干扰峰图的44 Da质量差表明它们是PEG或类PEG污染物。因此，并非所有LC-MS级溶剂都是相同的，在实施MAM方法时，包括流动相溶剂和试剂的评估是很重要的。
图1所示。使用两个品牌的LC-MS级乙腈作为流动相:品牌X(顶部为粉红色)和Thermo Scientific(底部为蓝色)进行LC-MS MAM法的对照(空白)运行。流动相为0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈二元梯度。显示peg样+44 Da的7个峰的m/z被标记为(棕色)。
赛默飞世尔科学提供两种等级的溶剂和混合物，经过全面测试，适合LC-MS分析，包括LC HRAM MS MAM。Fisher Chemical Optima级LC-MS溶剂和混合物由高杂质制成，并以批次对批次的一致性精确混合，并通过LC-MS进行测试。Thermo Scientific UHPLC-MS级溶剂是更高等级，更严格的规格，以满足最敏感的分析要求。两种等级的溶剂和混合物都经过了充分的测试，以确保低有机杂质，包括聚乙二醇。在新引入的赛默飞世尔科学MAM 2.0工作流程中，UHPLCMS级乙腈和水已被指定用于准备初始系统性能评估测试(SET)的流动相。
1.郝志奇，等，“单克隆抗体治疗药物质量控制的多属性方法性能概况”，中国药理学杂志。生物医学。肛。205 (2021)114330
2.Trina Mouchahoir等人，“来自MAM联盟实验室间研究的新峰值检测性能指标”，J. Am。Soc。质谱学，2012,32,913
3.杨浩，等，“一种用于肽图谱和监测的集成LC-MS系统性能评估测试”，热科学应用笔记000336 (2021)
